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細胞復蘇、傳代、凍存具體過程

更新時間:2021-10-11  |  點擊率:1778

一、 復蘇
1. 把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3. 把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
4. 標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5. 3天換一次培養(yǎng)基。


二、 傳代
1. 培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。
3. 加適當?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細胞就行),消化1-2分鐘。
4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5. 用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
6. 把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7. 倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細胞都吹起來。
8. 根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。


三、 凍存
把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制: 70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

要注意的就是無菌操作!

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