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大腸埃希氏菌O157:H7的發(fā)現(xiàn)和鑒別簡史

更新時間:2022-05-20  |  點擊率:3482

一、大腸埃希氏菌O157:H7的發(fā)現(xiàn)和傳播

作為人類致病菌的大腸埃希氏菌O157:H7初發(fā)現(xiàn)于1982年,它可產(chǎn)生志賀毒素,并可存在健康家畜的糞便中,可污染食品、水而傳播給人。食品、乳品和果汁的不充分加熱以及未干凈洗手常導致O157:H7的傳染風險。一些水果未洗凈而壓榨果汁,果汁未高溫滅菌,也可導致O157:H7傳染的發(fā)生。有人發(fā)現(xiàn),未加防腐劑的在冰箱存放的果汁中,O157:H7可存活20天以上,而加入0.1%的苯甲酸鈉可減少其存活時間至7天之內(nèi)。O157:H7可導致出血性腸炎和溶血性尿毒癥綜合征。

 

據(jù)美國2005年的報道,每年大腸埃希氏菌O157:H7感染病例達73000例。52%來源于食品,9%來源于水污染。食品污染中,約一半來源于絞碎的牛肉,并且夏季容易發(fā)生。

 

二、大腸埃希氏菌O157:H7的檢測

雖然PCR得到了相當程度的使用,但傳統(tǒng)的培養(yǎng)法仍*。2016年頒布的大腸埃希氏菌O157:H7的食品安全國家標準(GB4789.36—2016)完整的表述了大腸桿菌O157:H7的檢驗全流程,但其原理未提,下面簡要介紹一下。

 

O157:H7鑒別的一大依據(jù)是O157:H7不發(fā)酵山梨醇,而大多數(shù)大腸埃希菌發(fā)酵山梨醇。因此,傳統(tǒng)含乳糖的麥康凱培養(yǎng)基將乳糖替換為山梨醇,就形成了SMAC培養(yǎng)基。MAC即為麥康凱培養(yǎng)基英文的前三個字母,S為山梨醇英文的個字母。SMAC培養(yǎng)基的好處是,可將O157:H7與糞便菌群區(qū)分開來。O157:H7為無色菌落,而糞便菌群發(fā)酵山梨醇為粉色菌落。當然,可能有10%~20%的山梨醇非發(fā)酵菌也不是O157:H7(如赫爾曼埃希菌、O157:H16等),因此可能會有一些假陽性產(chǎn)生,還需后續(xù)再鑒別。曾有人測試過,SMAC培養(yǎng)基的靈敏度為*, 特異性為85%, 準確率為86%。盡管這一數(shù)字并不具有普遍意義,但SMAC培養(yǎng)基的特異性存在一定的不足是比較肯定的。

O157:H7還有一個特點,是不水解熒光染料MUG,因而不產(chǎn)生熒光。而普通大腸埃希菌水解MUG,會發(fā)出熒光,因而在國標中,在后的檢測步驟中采用了MUG-LST肉湯進行鑒別。

 

還有人發(fā)現(xiàn),結(jié)合O157:H7的鳥氨酸和賴氨酸脫羧試驗陽性,可提高山梨醇試驗對O157:H7的特異性。

 

1990年,Thompson等人發(fā)現(xiàn),96%的大腸埃希菌分離株的葡萄糖醛酸酶(glucuronidase)陽性,而O157:H7為葡萄糖醛酸酶陰性。Okrend等人在SMAC平板的基礎(chǔ)上加入5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖醛酸環(huán)己基銨鹽(簡稱BCIG)顯色劑(針對葡萄糖醛酸酶),發(fā)現(xiàn)可減少36%所需要挑取的錯誤的可疑菌落。于是,這便成為了大腸埃希氏菌O157:H7顯色培養(yǎng)基的工作基礎(chǔ)。

 

圖:HiMedia生產(chǎn)的大腸埃希菌O157:H7選擇性顯色培養(yǎng)基(貨號:MV157)

 

此外,還有免疫學和PCR方法來檢測O157:H7的,以及采用增菌肉湯形式來進行鑒別的。如HiMedia出的大腸桿菌O157:H7增菌鑒別肉湯(貨號M1598)。在增菌的同時就進行了鑒別。它還結(jié)合亞碲酸鹽(貨號FD230),使培養(yǎng)基更具有特異性和選擇性。它在接種后在35-37°C培養(yǎng)18-24小時,各菌屬或菌種的培養(yǎng)反應(yīng)顯示如下:

 

大腸桿菌——藍色,可能有輕微沉淀。加入FD230后,其生長受抑。

大腸桿菌O157:H7——深紫色至洋紅色,不受FD230影響。

阪崎氏腸桿菌——白色,可能有輕微沉淀。加入FD230后,其生長受抑。

肺炎克雷伯氏菌——藍綠色,不受FD230影響。

腸炎沙門氏菌——無色,可能有輕微沉淀,不受FD230影響。

福氏志賀氏菌——無色, 加入FD230,其生長受抑。

 

見下圖

 

圖:大腸桿菌O157:H7增菌鑒別肉湯(貨號M1598)。1.對照;2.大腸桿菌O157:H7(NCTC 12900);3.大腸桿菌(ATCC 25922);4.阪崎克羅諾桿菌(ATCC 12868);5.肺炎克雷伯菌(ATCC 13883)

 

這樣可將各個菌屬(種)進行區(qū)分。

 

 

參考文獻:

 

1.HiMedia顯色培養(yǎng)基手冊

 

2. Escherichia coli 0157:H7: Epidemiology, Pathogenesis, and Methods for Detection in Food. Journal of Food Protection. 1992,55(7):555-565

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