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HiCynth™改良煌綠瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基

更新時(shí)間:2017-09-08  |  點(diǎn)擊率:1486

HiCynth™改良煌綠瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基,經(jīng)改良后用于選擇性分離傷寒沙門氏菌之外的沙門氏菌,樣本是糞便、食物和奶制品。

 

組成:

成分                             g/L

HiCynth™蛋白胨5號(hào)     3.000

HiCynth™蛋白胨4號(hào)     10.000

乳糖                            10.000    

蔗糖                            10.000

氯化鈉                           5.000

酚紅                              0.080

煌綠                             0.0125

瓊脂                             20.000

zui終pH值(25℃)      6.9±0.2

 

使用指導(dǎo):

在1000ml蒸餾水中重懸29.05g培養(yǎng)基干粉。必要時(shí)加熱以*溶解。高壓滅菌(15磅121℃,15分鐘)。避免過(guò)熱。涼至45-50℃。要提高選擇性,可無(wú)菌加入1管水化的磺胺類添加劑(#FD068),混勻后倒入無(wú)菌平板。

 

原理和說(shuō)明:

沙門氏菌引起多種類型的感染,從輕微的自限性胃腸炎到危及生命的傷寒。zui常見(jiàn)的沙門氏菌病是自限性胃腸炎,發(fā)熱持續(xù)不到2天,腹瀉持續(xù)不到7天。

 

 

HiCynth™改良煌綠瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基為分離沙門氏菌的主要培養(yǎng)基,是由Kristensen等人描述1??挤蚵M(jìn)一步改進(jìn)2美國(guó)公共衛(wèi)生學(xué)會(huì)3FDA4,5也推薦使用煌綠瓊脂,歐洲藥典、英國(guó)藥典和印度藥典也描述了這一方法6,7,8。

 

 

該培養(yǎng)基含有煌綠,能抑制大多數(shù)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。傷寒沙門氏菌、志賀菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌被廣泛抑制。臨床標(biāo)本可直接接種在該培養(yǎng)基上。但是,由于高度選擇性,推薦該培養(yǎng)基與其他較少抑制作用的培養(yǎng)基一起使用,以增加恢復(fù)率的機(jī)會(huì)。

 

 

該培養(yǎng)基包含有HiCynth™蛋白胨4號(hào)和HiCynth™蛋白胨5號(hào)提供必要的氮源和碳源的化合物、長(zhǎng)鏈氨基酸、維生素,還有其他必需的營(yíng)養(yǎng)成分。乳糖和葡萄糖是能量來(lái)源,它們?cè)谂囵B(yǎng)基中發(fā)酵形成酸性pH值,可被酚紅指示劑檢測(cè)到。氯化鈉維持培養(yǎng)基的滲透壓平衡。煌綠抑制可能帶來(lái)污染的微生物菌落。當(dāng)樣本懷疑有大量的競(jìng)爭(zhēng)菌時(shí),可向該培養(yǎng)基添加磺胺醋酰(1g/L)和扁桃酸鈉(0.25g/L)。

 

 

非乳糖發(fā)酵菌在培養(yǎng)18-24小時(shí)后形成白色至粉紅色菌落。傷寒沙門氏菌和志賀菌不會(huì)在這種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。此外,變形桿菌、綠膿桿菌、枸櫞酸桿菌屬可能會(huì)模仿腸道菌產(chǎn)生紅色的小菌落。

 

質(zhì)量控制

外觀

淡黃色至淡粉色均一松散粉末

 

成膠性

結(jié)實(shí),相當(dāng)于2.0%瓊脂糖凝膠

 

制備好的培養(yǎng)基顏色和透明度

在平皿中為透明棕綠色至輕微乳白色凝膠

 

pH值(25℃)

6.70-7.10

 

培養(yǎng)反應(yīng)

30-35℃培養(yǎng)24-48小時(shí)?;謴?fù)率以細(xì)菌在大豆酪蛋白水解瓊脂上生長(zhǎng)為100%

微生物

接種量(CFU

生長(zhǎng)狀況

批次值(CFU)

恢復(fù)率

菌落顏色

傷寒沙門氏菌ATCC 14028

50-100

生長(zhǎng)旺盛

25-100

≥50%

粉白色

阿博尼沙門氏菌NCTC 6017

50-100

生長(zhǎng)旺盛

25-100

≥50%

粉白色

腸炎沙門氏菌ATCC13076

50-100

生長(zhǎng)旺盛

25-100

≥50%

粉白色

傷寒沙門氏菌ATCC 6539

50-100

生長(zhǎng)良好

15-40

30-40%

紅粉色

大腸桿菌ATCC 25922

50-100

基本不生長(zhǎng)

0-10

0-10%

黃綠色

大腸桿菌ATCC 8739

50-100

基本不生長(zhǎng)

0-10

0-10%

黃綠色

大腸桿菌 NCTC 9002

50-100

基本不生長(zhǎng)

0-10

0-10%

黃綠色

金黃葡萄球菌ATCC 25923

≥10³

抑制

0

0%

 

金黃葡萄球菌ATCC 6538

≥10³

抑制

0

0%

 

 

儲(chǔ)存和保質(zhì)期

30℃以下密閉保存。配好后的培養(yǎng)基2-8℃保存。在標(biāo)簽上的截止日期前使用。

 

參考文獻(xiàn):

1.  Kristensen M., Lester V, and Jurgens A., 1925,Brit.J.Exp.Pathol.,6:291.

2.  Kauffman F., 1935, Seit F. Hyg. 177:26.

3.  Downes F. P. and Ito K. (Ed), 2001, Compendiumof Methods for Microbiological Examination of Foods, 4th Ed. APHA,WashingtonD.C.

4.  Standard Methods for the MicrobiologicalExamination of Dairy Products, 1995, 19th Ed, APHA, Washington, D.C.

5.  Bacteriological Analytical Manual, 5th Ed,1978, AOAC, Washington D.C.

6.  The European Pharmacopoeia, 2014, Council orEurope, Strasbourg.

7.  The British Pharmacopoeia, 2016 vol. II,London.

8.  Indian Pharmacopoeia, 2014, Ministry of Healthand Family Welfare, Govt., of India.

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